РАЗРАБОТКА ОТЕЧЕСТВЕННОЙ ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ ANTI-HEV IGМ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ
Аннотация
Введение. Республику Беларусь не относят к странам, высокоэндемичным по вирусному гепатиту Е, при этом многочисленные исследования показали активную циркуляцию вируса гепатита Е (ВГЕ) среди людей и животных, имеющую латентный характер, что затрудняет своевременную диагностику инфекции. Цель исследования. Разработать и оценить качество отечественной иммуноферментной тест-системы для определения анти-ВГЕ IgM. Материал и методы. 96-луночные разборные планшеты, рекомбинантные белки ORF2 и ORF3 ВГЕ 3-го генотипа, пероксидазный конъюгат к IgM человека, растворы для разведения сывороток и конъюгата, содержащие бычий сывороточный альбумин. Результаты. Рекомендуемая концентрация рекомбинантных полипептидов ORF2 и ORF3 ВГЕ 3-го генотипа для сорбции составляет 2 и 1 мкг/мл, соответственно, оптимум разведения конъюгата 1:13 000. Ложноположительных и ложноотрицательных результатов не выявлено, чувствительность и специфичность составляют не менее 99%. Среднее значение коэффициента вариации внутри одного планшета – 6,4%, в пределах двух планшетов – 11,3%. Выводы. Характеристики разработанной национальной тест-системы соответствуют рекомендуемым стандартам, что свидетельствует о возможности ее внедрения в практику клинической лабораторной диагностики.
Литература
Kumar A, Beniwal M, Kar P, Sharma JB, Murthy NS. Hepatitis E in pregnancy. Int J Gynecol Obstet. 2004;85(3):240-244. https://doi.org/10.1016/j.ijgo.2003.11.018.
Nimgaonkar I, Ding Q, Schwartz RE, Ploss A. Hepatitis E virus: advances and challenges. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 2018;15(2):96-110. https://doi.org/10.1038/nrgastro.2017.150.
Gorski I, Babić I, Bingulac-Popović J, Topić-Šestan P, Jagnjić S, Jemeršić L, Prpić J, Jukić I. Prevalence of HEV RNA in Croatian blood donors. Transfus Clin Biol. 2023;30(2):244-248. https://doi.org/10.1016/j.tracli.2023.01.005.
Nagashima S, Takahashi M, Kobayashi T, Tanggis Nishizawa T, Nishiyama T, Primadharsini PP, Okamoto H. Characterization of the Quasi-Enveloped Hepatitis E Virus Particles Released by the Cellular Exosomal Pathway. J. Virol. 2017;91(22):e00822-17. https://doi.org/10.1128/JVI.00822-17.
Pallerla SR, Harms D, Johne R, Todt D, Steinmann E, Schemmerer M, Wenzel JJ, Hofmann J, Shih JWK, Wedemeyer H, C-Thomas Bock, Thirumalaisamy P Velavan. Hepatitis E virus infection: Circulation, molecular epidemiology, and impact on global health. Pathogens. 2020;9(10):856. https://doi.org/10.3390/pathogens9100856.
Le Blanc D, Poitras E, Gagné MJ, Ward P, Houde A. Hepatitis E virus load in swine organs and tissues at slaughterhouse determined by real-time RT-PCR. Int J Food Microbio. 2010;139(3):206-209. https://doi.org/10.1016/j.ijfoodmicro.2010.02.016.
Tsyrkunov VM, Davydov VV, Zhavoronok SV, CHernyak LK, Babenko AS, Marchuk SI, Gasich EL, Zadora IS. Kliniko-jepidemiologicheskaja i molekuljarno- geneticheskaja harakteristika pervogo sluchaja ostrogo gepatita E v Grodnenskom regione [Clinical-epidemiological and molecular-genetic characteristics of the first case of acute hepatitis Е in the Grodno region]. Gepatologija i Gastrojenterologija [Hepatology and Gastroenterology]. 2022;6(2):115-22. https://doi.org/10.25298/2616-5546-2022-6-2-115-122. https://elibrary.ru/ykoyzw. (Russian).
Alatortseva GI, Sidorov AV, Nesterenko LN, Lukhverchik LN, Amiantova II, Dotsenko VV, Vorobev DS, Ammur YI, Zhukina MV, Bajyzbekova DA, Mikhajlov MI, Potemkin IA, Kyuregyan KK, Nurmatov ZS, Nurmatov AZ, Kasymov OT, Zhavoronok SV, Krasochko PA, Zverev VV, inventors; Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera, assignee. Rekombinantnyj belok, soderzhashhij antigenno-znachimye fragmenty belkov virusa gepatita E, ispol’zuemyj v test-sistemah dlja serodiagnostiki gepatita E (varianty) [Recombinant protein containing antigen significant fragments of hepatitis E virus proteins, used in test systems for hepatitis E (embodiments)]. RU patent 2711907 C2. 2020 Jan 23. edn: NBFICC. (Russian).
Surjit M, Varshney B, Lal SK. The ORF2 glycoprotein of hepatitis E virus inhibits cellular NF-kappa B activity by blocking ubiquitination mediated proteasomal degradation of Ikappa Balpha in human hepatoma cells. BMC Biochem. 2012;13:7. https://doi.org/10.1186/1471-2091-13-7.
Chandra V, Holla P, Ghosh D, Chakrabarti D, Padigaru M, Jameel S. The hepatitis E virus ORF3 protein regulates the expression of liver-specific genes by modulating localization of hepatocyte nuclear factor 4. PLoS One. 2011;6(7):e22412. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0022412.
